Hplc جھاز

dr.joan

HPLC جھاز
طرق الكروماتوجرافي عالي الكفاءة ( عالي السرعھ ( للسوائل :
High Performance Liquid_Chromatography(HPLC)
تعتبر ھذه الطریقھ أھم تطویر في طرق الفصل الكروماتوجرافي للسوائل وفیھا یكون الوسط الساكن على
ھیئة جسیمات دقیقھ الحجم ویدفع بالوسط المتحرك ( السائل ) خلال العمود المملوء بالوسط الساكن
وتستخدم المضخھ لتیسیر (Psi ) بإستخدام مضخھ عند ضغوط تصل إلى 8000 رطل على البوصھ المربعھ
سریان الوسط المتحرك خلال العمود بسرعات تتراوح بین 50،0 5 مل /دقیقھ بالرغم من أن جسیمات
الوسط الساكن یصل قطرھا إلى عدة میكرو مترات فقط . وقد أمكن بالفعل الحصول على سرعات سریان
تتراوح بین 14 مل/ دقیقھ بإستخدام أعمدة مملؤه بجسیمات یصل نصف قطرھا إلى 5 میكرو متر . وبھذه
الطریقھ یمكن فصل المركبات صعبة التطایر أو تلك التي تتأثر بالحراره.
ویمكن في ھذه الطریقھ إستخدام جسیمات دقیقھ من مادة صلبھ لھا خاصیة الإدمصاص كوسط ساكن أومواد
لھا خاصیة الإستبدال الأیوني وكذلك المواد الھلامیھ ذات المسامات المحدده . ویمكن أیضاً إستخدام سائل
محمل على جسیمات دقیقھ من مادة صلبھ.
وھناك ثلاثة طرق عامھ لتحضیر الأوساط الساكنھ التي تناسب العمل بھذه الطریقھ وقد كان لإكتشاف ھذه
الطرق الفضل في سرعة إنتشار إستخدام ھذه الطریقھ وھذه الطرق ھي:
C- 1- ربط السائل المستخدم كوسط ساكن برابطھ كیمیائیھ مع جسیمات الماده الصلبھ الخاملھ مثل رابطة
وتستخدم ھذه الطریقھ لتحمیل الھیدرو كربونات المشبعھ طویلة ( hydrolysis ) . التي تقاوم التمیھ Si
السلسلھ والاثیرات المفلوره على ھلام السیلیكا.
على سطح جسیمات stationary phase Pellicular 2- تحمیل الوسط الساكن كطبقھ رقیقھ جداً
الماده الصلبھ وذلك لتقلیل ممرات الإنتشار والإنتقال خلال الوسط الساكن ، وھذا بالطبع یزید من سرعة
عملیة الفصل . وقد أمكن بإستخدام ھذه الطریقھ تحمیل أوساط ساكنھ على شكل طبقھ رقیقھ من مادة ھلام
السیلیكا أو مبادل أیوني أو سوائل مرتبطھ كیمیائیاً مع الطبقھ المسامیھ الخارجیھ . ولكن من عیوب ھذه
مما یستلزم إستخدام تركیزات منخفضھ جداً من العینھ ( Capacity ) الطریقھ قلة سعة الوسط الساكن
( Overloading ) . لضمان عدم تحمیل عمود الفصل فوق طاقتھ
3- إستخدام الوسط الساكن على شكل جسیمات مسامیھ كرویھ منتظمھ ذات أنصاف أقطار صغیره جداً مثل
20،15،10،5 میكرومتر ، وفي ھذه الحالھ یمكن إستخدام أعمدة قصیره ( 10 25 سم ) حیث ثبت أن
كفاءتھا أعلى وسعتھا أكبر من الأوساط الساكنھ القشریھ.
والمضخھ المستخدمھ لدفع الوسط المتحرك مصممھ بحیث تعطي ضغطاً ثابتاً أوسرعة سریان ثابتھ ویستخدم
في نھایة العمود كشافات عالیة الحساسیھ . ویتراوح طول أعمدة الفصل عادة من 25 سم إلى 2 متر ،
ونصف قطرھا بین 15 مم ، وھي تصنع إما من الزجاج أو من الحدید الصلب المقاوم(عدیم الصدأ ) (
ویكشف عادة عن المكونات المفصولھ من العمود بصوره مستمره وذلك بملاحظة Stainless steel ) .
الإمتصاص الطیفي لمحالیل المذابات المفصولھ أو بمتابعة معامل إنكسارھا . كما یمكن إستخدام كشاف یعتمد
وذلك بعد تبخیر المذیب منھا ( Flame ionization detector ) على خاصیة تأین المذابات في اللھب
. وبالرغم من حداثة ھذه الطریقھ من طرق الفصل إلا أن إستخدامھا ینتشر بسرعھ كبیره نظراً لكفاءتھا
المتمیزه وسرعتھا العالیھ . فمثلاً یمكن فصل خمس مركبات عطریة ھیدروكسیلیھ في أقل من 60 ثانیھ .
وتعتبر درجة الحراره من المتغیرات التي یمكن التحكم فیھا في ھذه الطریقھ للحصول على كفاءه أعلى
للفصل . وقد نجحت ھذه الطریقھ في فصل العدید من المخالیط التي لم یكن فصلھا سھلاً بالطرق العادیة .

حمل الملف المرفق لتتابع الموضوع هنا